第一情报 ---生物与医药

从Genentech公司申请的专利看重组药用蛋白分离纯化技术的进展

供稿人:彭建新  供稿时间:2004-12-23   关键字:药用蛋白  分离  纯化  
基因工程药物因具有其他药物无法比拟的优点,迅速成为制药工业中引人注目的领域,各国政府均视为新经济增长热点而大力支持。基因工程药物研发的主要环节包括:基因克隆和工程菌构造;重组细胞培养;目的产物重组蛋白分离纯化等。基因工程药物的质量和安全性很大程度上决定于下游的分离纯化过程,即从细胞培养物或培养液中经济、有效的分离目的产物,将污染物从最终的产品中去除。
 
Genentech是美国历史最久的生物技术公司,当前,其研制开发并获准生产新生物药品有18个,正在研制的项目有30个。2004年其公开的专利申请中,涉及新的重组药用蛋白分离纯化技术的专利有3项,包括从最常用的真核表达细胞CHO培养液、原核表达细胞大肠杆菌中分离纯化目的蛋白技术,分别为:
 
2003年4月25日 申请的世界专利WO2003102132(优先权:US375953P 26 Apr 2002;US423299 25 Apr 2003。)公开了从含有宿主蛋白(CHO蛋白)的混合物中分离纯化目的蛋白技术,具体过程:
 
(1)一或两次非亲和色谱技术;
 
(2)HPTFF,经过纯化目的蛋白中宿主蛋白的含量<100ppm。非亲和色谱为离子交换色谱(阳离子、阴离子、混合模式)和蔬水作用色谱,阳离子交换基团为羧甲基,BAKERBOND ABX,硫丙基(SP)或磺酰,阴离子交换基团为DEAE或季铵盐。该项技术可用于单克隆抗体、多克隆抗体、人源化抗体、人抗体、抗体片段(HER2抗体,CD20抗体,IL-8抗体,VEGF抗体,PSCA抗体,CDlla抗体,抗IgE抗体,Apo-2 受体抗体,TNF-a抗体,组织因子抗体(TF),CD3抗体,CD25抗体,CD34抗体,CD40抗体,tac抗体,CD4抗体,CD52抗体,Fc受体抗体,癌胚抗原(CEA)抗体,乳腺上皮细胞抗体,大肠癌细胞抗体,CD33抗体,CD22抗体,EpCAM抗体,GpIIb/IIIa抗体,RSV抗体,CMV抗体,HIV抗体,肝炎抗体,avp3抗体,人肾细胞癌抗体,anti人17-1A,抗-人结直肠肿瘤抗体,抗人黑色素瘤抗体,抗人鳞形细胞癌抗体和抗人白细胞抗原抗体),免疫粘附分子,抗体样分子的分离纯化。目前该项专利已经在美国和澳大利亚公开:US2003229212;U2003265235。
 
2003年9月5日申请的美国专利US2004049012(优先权:US408653P 06 Sep 2002;US655874 05 Sep 2003。)公开了从大肠杆菌中提取药用蛋白技术,具体过程为:
 
(1)降低大肠杆菌细胞溶液的pH值(不低于4.0);
 
(2)破碎细胞,使目标蛋白从细胞中释放到酸性溶液中;
 
(3)离心、柱层析分离目标蛋白。在降低大肠杆菌细胞溶液的pH值之前,在溶液中可加入增溶剂,二价阳离子(钙、镁)、聚乙烯亚胺。该公司就该项技术还申请了世界专利和澳大利亚专利,公开号分别为:WO2004022581;AU2003270380。
 
2003年9月8日申请的世界专利WO2004024866(优先权:US410334P 11 Sep 2002; US659825 10 Sep 2003)公开了离子交换色谱纯化蛋白技术,采用盐梯度洗涤的方式。目前该项专利已经在美国和澳大利亚公开:US2004082047;AU2003265994。

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