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有关禽流感病毒H5亚型检测的专利保护情况

供稿人:彭琰  供稿时间:2005-11-24   关键字:禽流感  H5亚型病毒  检测专利  
2005年11月9日在瑞士日内瓦落下帷幕的禽流感问题国际会议通过了用以指导今后国际社会抗击禽流感的行动步骤。完善兽疫检测系统、加强对动物和人类疫病的早期快速预警反应体系是该行动步骤的重要组成部分。
 
至2005年11月23日为止,我国已公开的有关禽流感的发明专利保护共有20项,其中涉及禽流感检测的专利有以下11件——
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
欧洲专利局esp@cenet公布的世界范围内名称关键词含avianinfluenza的专利共有12项,其中涉及禽流感检测的专利共4项,除两项中国专利(CN200410088716.8、CN200410014289.9)外,另外两项是由意大利自然人CAPUAILARIA等申请的英国专利(GB2412731-2005-10-05)和香港HONGKONGDNACHIPSLTD(HK)申请的专利(HK1045786-2002-12-06)。
 
下面详细介绍一下国内有关高致病性禽流感病毒H5亚型检测的专利保护情况。
 
2004年3月9日扬州大学对禽流感病毒多重PCR快速检测方法申请了发明专利保护(申请号:CN200410014289.9)。该发明公开了一种鉴定病毒,特别是鉴定禽流感H5、H9亚型病毒的检测方法。用Trizolkit提取样本基因RNA,再进行反转录合成cDNA,然后进行一次性PCR扩增特定的多个基因,最后电泳鉴定。由于单个疑似病例样本中的特征基因数量极少,本发明通过将样本的RNA反转录合成cDNA,再一次性同时对可能存在的NP、H5A、H9A基因扩增,形成大量的基因复制片段,比较方便,一次就能鉴定是否为禽流感,以及属于H5或H9亚型作出判断。
 
2004年4月19日中国人民解放军军需大学军事兽医研究所对禽流感病毒反转录聚合酶链式反应检测方法及试剂盒申请了发明专利保护(申请号:CN200410010805.0),该发明目的在于建立了禽流感病毒通用型RT-PCR检测方法和H5、H7、H9亚型分型检测的三联RT-PCR检测方法,最终组装成禽流感病毒(AvianInfluenzaVirusAIV)系列RT-PCR检测试剂盒。其步骤是:a、建立AIV基因储备库:用收集到的H5、H9亚型AIV毒株,进行克隆,建立AIV基因储备库;b、根据AIVM1P基因具有型的特异性,确定通用型RT-PCR检测方法的靶序列为M1P基因;根据AIVHA基因具有亚型的特异性,确定亚型分型检测的RT-PCR检测方法的靶序列为HA基因;c、引物设计:借助DNASTAR软件设计特异性RT-PCR引物;d、通用型RT-PCR检测方法建立:用通用型引物对所收集到的H5、H9亚型AIV毒株进行RT-PCR,建立通用型RT-PCR检测方法;e、亚型单项RT-PCR检测方法建立:用H5、H7、H9亚型分型检测引物分别对相应毒株、质粒进行RT-PCR或PCR和反应条件的优化,建立各亚型的单项RT-PCR检测方法。
 
2004年6月25日深圳太太基因工程有限公司对用于高致病性禽流感H5亚型核苷酸片断的RT-PCR扩增引物和探针序列申请了发明专利保护(申请号:CN200410027814.0)。引物序列包括:由上游引物H5pf1673序列为GACCAGCTACCATGATTGCCA和下游引物H5pr1600序列为GGAGTCAAATTTGGAATCAATGG组成的引物对,以及上游引物的互补序列CTGGTCGATGGTACTAACGGT和下游引物的互补序列CCTCAGTTTAAACCTTAGTTACC,还包括上游引物H5pf1673位置向5’端方向延伸10个碱基,下游引物H5pr1600位置向3’端方向延伸10个碱基,向5’端方向延伸10个碱基区域范围内得到的引物序列及互补序列。探针序列包括:探针H5pb1655序列为TGCTAGGGAACTCGCCA及互补序列ACGATCCCTTGAGCGGT,以及该探针序列向3’端方向延伸10个碱基和向5’端方向延伸10个碱基区域范围内得到的探针序列及互补序列。同时,该公司和中华人民共和国深圳出入境检验检疫局对用于禽流感H5、H7和H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测的引物、探针序列和方法申请了发明专利保护(申请号:CN200410027815.5)。该专利通过对禽流感病毒H5、H7和H9亚型已知基因组序列的比较分析,设计出能分别检测禽流感病毒H5、H7和H9亚型的引物和探针序列;采用Joe、Rox、Ned、Hex、Tet、Fam或Vic荧光素分别标记用于检测禽流感病毒H5、H7、H9亚型的探针序列;将分别用于禽流感病毒H5和H7或H5和H9或H7和H9两种不同亚型的引物和探针,或分别用于禽流感病毒H5、H7、H9三种不同亚型的引物和探针置于同一个反应管中,使用荧光PCR检测仪进行实时荧光RT-PCR反应。
 
2004年11月1日中国农业大学对一种检测H5N1亚型禽流感病毒的方法及其专用试剂盒申请了发明专利保护(申请号:CN200410088716.8)。该发明提供的检测H5N1亚型禽流感病毒的专用试剂盒,包括A型禽流感病毒通用引物NPF和NPL,H5亚型禽流感病毒血凝素的特异性引物H5F和H5L以及N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶特异性引物N1F和N1L;所述NPF具有序列表中序列1的核苷酸序列,所述NPL具有序列表中序列2的核苷酸序列,所述H5F具有序列表中序列3的核苷酸序列,所述H5L具有序列表中序列4的核苷酸序列,所述N1F具有序列表中序列5的核苷酸序列,所述N1L具有序列表中序列6的核苷酸序列。该发明的方法及试剂盒不但可用于实验室的诊断与科研,还可用于大规模的流行病学调查。
 
参考文献
[1]深圳太太基因工程有限公司.用于禽流感H5亚型实时荧光RT-PCR检测的引物和探针序列.中国专利.CN200410027814.0.2005.11.9.
 
[2]中国人民解放军军需大学军事兽医研究所.禽流感病毒反转录聚合酶链式反应检测方法及试剂盒.中国专利.CN200410010805.0.2005.11.2.
 
[3]深圳太太基因工程有限公司,中华人民共和国深圳出入境检验检疫局.用于禽流感H5、H7和H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测的引物、探针序列和方法.中国专利.CN200410027815.5.2005.9.21.
 
[4]中国农业大学.一种检测H5N1亚型禽流感病毒的方法及其专用试剂盒.中国专利.CN200410088716.8.2005.7.6
 
[5]扬州大学.禽流感病毒多重PCR快速检测方法.中国专利.CN200410014289.9.2005.1.5.
 
作者简介
彭琰,上海情报服务平台兼职情报分析员

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