第一情报 ---化学工业

水产品中孔雀石绿(MG)和隐性孔雀石绿ELISA检测技术及试剂盒

供稿人:宋鸿  供稿时间:2006-9-21   关键字:孔雀石绿  隐性孔雀石绿  ELISA  
在以色(质)谱技术为核心的孔雀石绿和隐性孔雀石绿化学检测技术和以竞争性酶联免疫法(ELISA )为代表的孔雀石绿和隐性孔雀石绿快速生物检测技术中,竞争性酶联免疫法(ELISA )具有快速、准确和无污染等优点。美国柏尔 BIOO Scientific公司和美国Beacon公司已有成套的孔雀石绿及其代谢物隐性孔雀石绿的ELISA试剂盒面市。这两家公司的ELISA检测试剂盒已经进入中国,在中国的销售商分别为广州恩康生物科技有限公司 和北京安易世纪贸易有限公司。
 
美国Bioo Scientific研制的MaxSignalTM孔雀石绿ELISA试剂盒已经申请了专利, 用于鱼、虾等水产品的检测。简单、快速、高灵敏度、低成本,使政府机构、海产加工者和质保机构可以检测到水产品中的孔雀石绿,检测下限达到0.6ppb,回收率80-95%,可以快速地从鱼虾中提取孔雀石绿(小于2小时),满足消费者对食品安全的要求。该试剂盒在检测之前,将无色隐性的孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)转变成有色的孔雀石绿。在鱼类组织中有色的MG通过生物消化会大部分地(大约80%)变成无色的孔雀石绿,试剂盒提供的特别氧化剂液可以将无色LMG变回有色的MG形式,这样就可以通过该试剂盒检测全部的孔雀石绿的含量。96孔高通量定量检测,检测下限为0.5ppb。与其他物质的交叉反应率如下:
 
孔雀石绿
100%
无色隐性孔雀石绿
100%
结晶紫
42%
无色结晶紫
<0.01%
瘦肉精
<0.01%
Sulfumethazine
<0.01%
氯霉素
<0.01%
呋喃唑酮
<0.01%
 
美国Beacon公司的孔雀石绿检测试剂盒利用酶联免疫吸附测定法进行食品中孔雀石绿的定量测定。Beacon孔雀石绿检测试剂盒能检测孔雀石绿及其相似物,对水产品的检测限为0.5 ppb。交叉反应率(%CR)如下:
 
种类
% CR
孔雀石绿
100%
隐性孔雀石绿
< 1%
 
但是采用竞争性酶联免疫法(ELISA )方法并不是国外一统天下,我们国内的相关研究也具有相当的优势,其中尤以湖南农业大学、中华人民共和国上海出入境检验检疫局和中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所为代表。
 
湖南农业大学龚朋飞在其2005年的临床兽医专业硕士论文中介绍其通过LMG全抗原的合成和抗体的制备,初步建立了LMG的ELISA测定方法。制备了副品红的偶联物,但制备的多克隆抗体不能特异地针对半抗原。重新合成氨基无色孔雀石绿并制备了其全抗原。免疫并进行细胞融合后,获得一株稳定分泌针对LMG抗体的细胞株——5E9。优化了ELISA检测LMG(鱼肉中)样品试剂盒的反应条件:检测时间为4h,定量限为0.427ng/ml,回收率83.2~122%。
 
中华人民共和国上海出入境检验检疫局和中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所就“水产品中孔雀石绿间接竞争ELISA检测试剂盒”共同申请了中国专利CN1766623A(公开日:2006.5.3;申请日:2005.10.8)。该试剂盒的检测板为包被无色孔雀石绿与白蛋白偶联物的可拆96孔酶标板,抗无色孔雀石绿抗体为利用无色孔雀石绿与白蛋白的偶联物免疫小鼠而制备的单克隆抗体,检测样品先经过匀质后用乙酸乙酯和环己烷进行提取,调节pH值后稀释用于检测。样本检测的判定标准为:以标样浓度的对数值为横坐标,抑制率为纵坐标的回归曲线。根据每个样品的抑制率就可从曲线上读出相对应样品的浓度。该方法检测的灵敏度为0.0023μg/ml,检测范围是0.0016-1μg/ml。本发明试剂盒的操作简单,能较好满足目前对水产品孔雀石绿残留检测的迫切的需要,用于海关检测、食品卫生部门检测等,易于大范围推广应用。回收率92-112%。
 
参考文献
1.龚朋飞,孔雀石绿单克隆抗体的制备及其检测试剂盒的初步研制,湖南农业大学临床兽医专业硕士论文,2005
 
2.中华人民共和国上海出入境检验检疫局;中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所,水产品中孔雀石绿间接竞争ELISA检测试剂盒,CN1766623A(公开日:2006.5.3;申请日:2005.10.8)
 
 
4.美国Beacon,美国Beacon 公司孔雀石绿ELISA定量检测试剂盒
 
 
 

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